Almacenamiento: a -20 °C. 

El kit de clonación sin costuras Limitless™ ELZ Fusion es una nueva, rápida y eficiente tecnología de clonación dirigida por ADN de Gibson Assembly que permite múltiples inserciones de genes diana en cualquier posición de cualquier vector, eliminando la necesidad de clonar. Puntos y múltiples sitios de clonación. El kit de clonación sin costuras Limitless™ ELZ Fusion es extremadamente sencillo de usar: solo requiere la linealización del vector, la mezcla con fragmentos amplificados por PCR que son completamente homólogos al vector (15-40 pb) y la reacción a 37 °C. En cuestión de horas, sin enzimas, la transformación directa puede completar la clonación. La tasa de positividad es superior al 95 %.

Principio experimental

Utilizando pUC57 como vector, inserte una secuencia aleatoria como ejemplo. El vector pUC57 se digirió con BamHI y HindIII o se amplificó utilizando el cebador de amplificación pUC (cebador morado) para obtener un vector pUC57 linealizado, que se purificó para obtener un vector linealizado.

Los cebadores de amplificación Lambda (cebadores rojos) se utilizaron para amplificar los insertos que contenían la misma homología con el vector en ambos extremos. Tras la mezcla, se llevó a cabo la recombinación homóloga en el sistema Limitless™ ELZ Fusion, y el producto recombinante se transformó en la cepa huésped. Tras el periodo de latencia, se puede extraer el vector de clonación recombinante.