El ADN es propenso a dañarse bajo el ataque de radicales libres (como ·OH), es decir, la desoxipentosa se rompe, el enlace difosfato se rompe y la base se rompe o se desprende, lo que puede producir además la rotura de una sola cadena o fractura de doble cadena. Fije las células en agarosa de bajo punto de fusión, aplique una pequeña cantidad de células en un portaobjetos de vidrio, destruya la membrana celular con una solución alcalina alta en sal y desenrolle las moléculas de ADN con la solución alcalina. Coloque el portaobjetos en la solución de electroforesis y, bajo la acción del campo eléctrico, las moléculas de ADN se mueven hacia el ánodo. Si el daño al ADN es severo y hay muchos fragmentos, la velocidad de electroforesis es rápida. Las macromoléculas de ADN intactas permanecen en su lugar debido a la barrera de la membrana celular. Con EB, tinción PI o tinción de plata, se puede observar que las células con ADN dañado se asemejan a cometas, para el análisis cualitativo. También se puede utilizar software relacionado para el análisis cuantitativo.

Componentes del kit

Buffer de lisis:

DMSO

Agarosa de punto de fusión normal (NMA)

Agarosa de punto de fusión bajo (LMA)

Yoduro de propidio (PI)

Equipo y reactivos necesarios:

Centrífuga de baja velocidad, electroforesis horizontal, microscopio de fluorescencia, baño María a temperatura constante (37 y 45°C), portaobjetos, cubreobjetos, placas, micropipeta, 1.5 ml de microbio, Buffer Tris-HCl 0.4 mmol/L (pH 7,5), PBS